Tesis

2019 - ARGENTINA
Biólogo Molecular Héctor Gabriel Avila

Echinococcus granulosus sensu lato en Argentina: obtención de mapa epidemiológico y desarrollo de un sistema de diagnóstico molecular aplicable en programas de control de la Hidatidosis.



El miércoles 13 de marzo de 2019, en el aula 28 de la Escuela de Graduados de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UBA, el Licenciado en Biología Molecular Héctor Gabriel Avila, obtuvo el grado de Doctor de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Veterinarias.

Su tesis “Echinococcus granulosus sensu lato en Argentina: obtención de mapa epidemiológico y desarrollo de un sistema de diagnóstico molecular aplicable en programas de control de la Hidatidosis”, la realizó en el Centro de Investigación en Zoonosis de la Provincia del Chubut y en el Instituto de Microbiología y Parasitología Médica de la Universidad de Buenos Aires.

Su directora de tesis fue Laura Kamenetzky, Licenciada en Biología y Doctora de la Universidad de Buenos Aires. Investigadora Independiente del CONICET y del Instituto de Microbiología y Parasitología Médica de la UBA. Su Co-Director fue el Veterinario Oscar Jensen del Centro de Investigación en Zoonosis.

Fueron sus jurados las doctoras María Celina Elissondo de la Universidad Nacional de Mar del Plata, Miriam Mabel Ribicich, de la Universidad Nacional de Buenos Aires y María Cecilia Venturini de la Universidad Nacional de La Plata

Resumen
 La equinococcosis quística (EQ) es una enfermedad desatendida que afecta al ganado y humanos, especialmente a poblaciones de áreas remotas con economías y servicios de salud frágiles. El agente causante es el parásito cestode Echinococcus granulosus sensu lato (s. l.) compuesto por cinco especies y ocho genotipos: E. granulosus sensu stricto (G1 y G3), E. equinus (G4), E. ortleppi (G5), E. canadensis (G6, G7, G8 y G10) y E. felidis. Estas especies/genotipos difieren en la especificidad de hospedador, patogenicidad, antigenicidad, períodos pre-patentes, entre otras características. En Argentina circulan tres especies: E. granulosus s.s. (G1 y G3), E. ortleppi (G5) y E. canadensis (G6 y G7). El objetivo de la presente tesis fue elaborar un mapa epidemiológico de los genotipos/especies circulantes de E. granulosus s. l. en Argentina y desarrollar dos técnicas de copro-LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification) para ser aplicados en estudios de epidemiología molecular y diagnóstico en hospedador definitivo.En el presente trabajo de tesis se analizaron por amplificación en cadena de la polimerasa (PCR) de una región del gen mitocondrial cox 1, con posterior secuenciación y alineamiento con secuencias cox1 de referencia de especies/genotipos de E. granulosus s. l., 98 muestras provenientes de diferentes hospedadores y zonas geográficas de la Argentina, informándose por primera vez la presencia de la especie E. canadensis (G6) en humanos provenientes de San Juan, San Luis y Salta; y E. ortleppi (G5) en la provincia de San Juan, además, se ampliaron los datos para las provincias de Buenos Aires, Córdoba, Chubut, Río Negro, Catamarca y Santa Fe, donde el número de casos analizados era escaso. Se optimizó la extracción de ADN de protoescólices, capa germinal, adultos, heces y esputo para análisis moleculares. Para el análisis de las muestras, se implementaron caminos alternativos a la secuenciación de productos PCR para ser implementados en estudios de epidemiología molecular. Se realizó la validación de ensayos de digestión de dichos productos por la enzima AluI, con el objetivo de diferenciar a la especie E. granulosus s. s. del resto de especies, y se utilizó el análisis de curvas de alta resolución de fusión (HRM, por su término en inglés: High Resolution Melting) para la identificación y diferenciación entre las especies E. granulosus s. s., E. ortleppi, y E. canadensis. Respecto al diagnóstico en el hospedador definitivo en el presente trabajo se pusieron a punto y diseñaron dos sets de primers LAMP, el primero consta de tres sub-sets de primers para la identificación de las especies E. granulosus s.s., E. ortleppi y E. canadensis, por separado, el cual fue puesto a punto para la identificación de especies a partir de heces, con el objetivo de ser empleados en estudios de epidemiología molecular. Por último, se diseñó y puso a punto un set de primers LAMP capaz de detectar las tres especies circulantes en Argentina de forma simultánea en una sola reacción, con el objetivo de ser propuestos como una nueva herramienta alternativa para el diagnóstico. Los resultados obtenidos ampliaron los conocimientos sobre la epidemiología molecular de E. granulosus s. l. en Argentina, los cuales son útiles teniendo en cuenta las diferencias existentes entre las especies que conforman el complejo. Por último, se puso a punto un sistema de diagnóstico basado en LAMP con valores de sensibilidad analítica de entre 10 fg y 100 fg de ADN, lográndose reacción positiva a partir de ADN extraído de heces caninas a las que se agegó un solo parásito adulto. La reacción permitió detectar ADN de las especies de E. granulosus s. l. circulantes en nuestro país y resultó específica, dado que no se obtuvieron productos LAMP con ADN de perro, Dipylidium caninum, Toxocara canis, Toxocara cati, Toxascaris leonina, Ancylostoma caninum, Taenia hydatigena y Tenia crassiceps. Este sistema diagnóstico podría ser implementado en zonas endémicas con bajos recursos y equipamientos. Ambos resultados contribuyen de forma activa al conocimiento básico y aplicado de la EQ en la República Argentina.

Director: Kamenetzky, Laura
Codirector: Jensen, Oscar

Citación: Avila, Héctor Gabriel; Kamenetzky, Laura; Jensen, Oscar; Echinococcus granulosus sensu lato en argentina: obtención de mapa epidemiológico y desarrollo de un sistema de diagnóstico molecular aplicable en programas de control de la hidatidosis; 13-3-2019

El correo del Doctor  Gabriel Avila  hectorgabrielavila@gmail.com



2004 – CHILLAN – CHILE
Veterinaria IRIS OLIVIA VIVALLO CUEVAS

EVALUCION DE LA VACUNA EG95 CONTRA HIDATIDOSI EN OVINOS

Tesis presentada por  IRIS OLIVIA VIVALLO CUEVAS presentada a la Faculta de Medicina Veterinaria de Chillan, Universidad de Concepción, Chile, para optar el título de Medico Veterinario en el año 2004.

En año 2003 se evaluó un ensayo realizado en la Facultad de Veterinaria de Chillán, ubicado en la VIII región de Chile, entre los años 2001 por  IRIS OLIVIA VIVALLO CUEVAS, con la dirección de los profesores Luis Rubilar  de la cátedra de Parasitología de Chillan y Verónica Madrid de Inmunología de Concepción.



Los ovinos de raza Suffolk a la edad de corderos recibieron dos dosis de vacuna EG95 con el adyuvante Quil A, producida en el Ag Reserch de Nueva Zelandia, realizándose el desafío con proglótidos de E. granulosus obtenidos de perros de la región del Alto Bío Bío.

A la necropsia, realizada 13 meses después de la segunda dosis, se detectaron 291 quistes en los 10 ovinos testigos y 3 quistes en los doce ovinos vacunados.





2018 – TANDIL - ARGENTINA
Veterinaria Cristina Elizabeth Rau,

Análisis epidemiológico de Hidatidosis bovina en la Comarca Andina del Paralelo 42º.

Tesina de la Orientación de Sanidad Animal, presentada para optar al grado de Veterinario de la estudiante  Cristina Elizabeth Rau, de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional del Centro, de Tandil, Provincia de Buenos Aires.


Su directora fue la Dra Mariana A. Rivero y su tutor el Medico Veterinario Ricardo Abel Fernández del Programa de Control de la Hidatidosis de la provincia del Chubut.


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